Билирубин на прах CAS 635-65-4се извлича главно от жлъчката. Билирубинът е неразтворим във вода, разтворим в органични разтворители като бензен, хлороформ и въглероден дисулфид и слабо разтворим в етанол и етер. Билирубинът може също да се разтвори в гореща смес от етанол и хлороформ. Натриевата сол на билирубина е лесно разтворима във вода, но неговите калциеви, магнезиеви и бариеви соли са неразтворими във вода. Билирубинът е моноклинен кристал със светлооранжев или наситен червеникавокафяв цвят. Неговото сухо твърдо вещество е относително стабилно, а разтворът на хлороформ също е относително стабилен на тъмно. Той е нестабилен в алкален разтвор (като 0.1 mmol/L натриев хидроксид) или при среща с йони на тривалентно желязо и бързо се окислява до биливердин. Билирубинът може да се свърже с глицин, аланин или хистидин. Добавянето на серумен протеин, витамини или EDTA може да стабилизира билирубина.
1. Приготвяне на калциева сол чрез индиректен метод на екстракция на калциева сол: добавете 3-3.5 пъти наситен супернатант с варна вода в прясна свинска жлъчка при разбъркване и след това продължете да разбърквате 5-10min, Ph{ {4}}, отстранете пяната при нагряване до 50 градуса с марля, продължете да загрявате до кипене, задръжте за 2 минути, охладете, филтрирайте и получете калциева сол. Приготвяне на крайния продукт с билирубин: Вземете калциева сол и добавете 0.8 пъти количеството вода, за да направите паста, пресейте я през 30-40 мрежа, добавете 0,3% антиоксидант към филтрата, добавете сол и киселина за да настроите рН на 1,5, оставете да престои 4 часа, филтрирайте, добавете 8-10 пъти количеството 80% етанол към филтърната утайка, натрошете и разбъркайте добре, добавете антиоксидант, оставете да престои една нощ и получете утайка. Добавете 4-6 пъти количеството от 80% или повече етанол и антиоксидант, разбъркайте и накиснете за една нощ. Повторете този процес 3-4 пъти и изсушете утайката под 70 градуса, за да получите готовия билирубинов продукт.
Утаяване на калциева сол [HCl, тежък натриев сулфит] → утаяване [етанол, тежък натриев сулфит] → утаяване [70 градуса] → билирубинов продукт.
2. Приготвяне на калциев билирубинат чрез метод на екстракция с хлороформ: Прясна свинска жлъчка се регулира до pH 12 с натриев хидроксид, загрява се до кипене, добавя се разтвор на калциев хлорид, след това се загрява до кипене, охлажда се, филтрува се, за да се получи калциев билирубинат. Свинска жлъчка [NaOH, CaCl2] → [pH 12, 100 градуса] Приготвяне на билирубинов прах CAS 635-65-4 калциева сол билирубинов краен продукт: билирубиновата калциева сол се регулира до рН 1-2 с 1:1 солна киселина, киселата вода се отцежда, хлороформът се екстрахира с хлороформ, промива се с безводен етанол и разтворът се оставя при около 5 градуса, за да се получи билирубинов краен продукт.
Билирубинова калциева сол [HCl] → [pH1-2] киселинно съединение [хлороформ, безводен етанол] → [5 градуса] билирубин краен продукт
3. Подобрен метод с калциева сол за подкиселяване с калциева сол: Вземете прясна свинска жлъчка и добавете 1% калциев хидроксид, разбъркайте добре, бързо загрейте до 90-97 градуса, дръжте на топло за 10 минути и филтрирайте, за да получите калциева сол. Загряването до 4 0 градуса ще доведе до появата на мазнина, която може да бъде внимателно отстранена. Получената калциева сол може да се измие веднъж с гореща вода, за да се отстранят излишните алкали и други примеси. Вземете калциева сол и добавете повече от 10 пъти повече вода, за да я разпръснете равномерно. Добавете 1% антиоксидант и разбъркайте (60r/min), за да добавите 1:2 солна киселина на капки. В рамките на 40 минути достигнете pH 2,0 и изчакайте, докато pH остане непроменено, за да получите киселинно вещество. Свинска жлъчка [1% калциев хидроксид] → [90-97 градус, 15 минути] Жлъчна калциева сол [антиоксидант, солна киселина] → [pH2,40 минути] Промиване с алкохол с кисела киселина, промиване с вода: Подкиселеният билирубин се диспергира равномерно при стайна температура с 10 пъти количество етанол, pH не трябва да е по-високо от 5, добавя се 0,5% антиоксидант, разбърква се и се оставя за около 1 час за наслояване. Отидете до горния слой алкохолен разтвор и съберете утаения билирубин. Измийте билирубина с 50 градуса топла вода за около 5 минути, съберете плаващия билирубин, бързо добавете етанол за дехидратация и отстранете етанола, за да получите суров билирубин. Киселинно съединение [етанол] → [1h] утаяване на билирубин [50 градуса гореща вода] → [етанол] екстракция на суров билирубин, изпаряване, кристализация и сушене: Вземете суров билирубин и добавете 10 пъти хлороформ, за да разклатите при 50 градуса за 10 минути. Ако е необходимо, екстрахирайте 2-3 пъти, като остатъкът трябва да е бял. Екстрактът от хлороформ се подлага на вакуумна дестилация до почти изсъхване, което води до образуването на повечето билирубинови кристали. След охлаждане до стайна температура се добавя етанол и допълнително се охлажда до 4 градуса за 10 минути. Кристалите билирубин се филтрират и третират с безводен етанол или етер, последвано от вакуумно сушене, за да се получи висококачествен билирубин.
Суров билирубин [хлороформ] → [10 минути] разтвор на хлороформ [кристализация] → висококачествен билирубин
4. Приготвяне на разтвор за хидролиза чрез метод на екстракция с йонообменна смола: Вземете прясна кравешка жлъчка, филтрирайте я с марля, добавете 2 mol/L разтвор на натриев хидроксид, за да коригирате рН до 10, докато разбърквате, кипнете и филтрирайте, за да получите хидролизата.
Адсорбция и елуиране на жлъчна киселина от колона със смола от хидролизен разтвор: Изсипете преварения разтвор за хидролиза в предварително загрятата колона със смола, докато цветът на изтичащия поток стане по-тъмен и адсорбцията се насити.
Добавете студена вода, докато температурата вътре в колоната падне до стайна температура, и след това добавете разреден разтвор на натриев бисулфит хидрохлорид от горната част на колоната, за да направите pH на изтичащия поток 1.
Промива се със 75% етанол, събира се, когато елуентът е тъмнозелен мътен разтвор и се промива, докато отпадъчният поток стане бистър и рН е почти неутрално. Промийте отново с 95% етанол.
Съберете разтвора за елуиране на етанол за получаване на жлъчна киселина. Разтвор за хидролиза [йонообменна колона] → [75% етанол, 95% етанол] Етанолов елуент за елуиране на билирубин, концентрация и изсушаване: Освободете целия 95% етанол от колоната, накиснете в хлороформ за 10 минути и съберете хлороформния елуент, докато спре появява се жълт цвят.
Дестилирайте хлороформния елуент почти до сухо, добавете безводен етанол и продължете възстановяването, докато свърши хлороформът. Филтрира се, докато е горещ, събира се билирубинът, изсушава се и се получава готовият билирубинов продукт.
Йоланда
Мобилен: +86 -29-86107037-8012
Имейл:sales9@konochemical.com
Тел/Wechat: 18729555803